FITC-xtra 异硫氰酸荧光素 货号135-AAT Bioquest荧光染料

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FITC-xtra 异硫氰酸荧光素

FITC-xtra 异硫氰酸荧光素

FITC-xtra 异硫氰酸荧光素 货号135 货号 135 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 2544
Ex (nm) 498 Em (nm) 526
分子量 620.52 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

FITC-xtra 异硫氰酸荧光素是美国AAT Bioquest生产的荧光素，虽然FITC是用于制备绿色荧光生物共轭物的最流行的荧光标记染料，但是FITC存在某些限制，例如用于显微镜成像的严重光漂白和pH敏感荧光。与相应的FITC缀合物相比，用FITC-xtra制备的蛋白质缀合物是非常优秀的。FITC-xtra缀合物比FITC缀合物明显更亮，并且更加光稳定。另外，FITC-xtra的荧光不受pH（4-10）的影响。这种pH不敏感性是对FITC的重大改进，FITC仅在pH大于9时才发出其最大荧光，FITC-xtra具有几乎相同FITC的光谱特性。此外，FITC-xtra在温和缀合条件下比FITC产生高得多的缀合产率。像5-FITC，FITC-xtra抗体缀合物适合于488nm激光线的激发，使其成为相应的FITC标记的抗体缀合物的替代物。在检测条件相同的情况下，FITC-xtra抗体缀合物提供比相应的FITC标记的缀合物高得多的信号/背景比。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的FITC-xtra 异硫氰酸荧光素。 

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产品说明书

实验方案

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（例如，1M碳酸钠溶液或1M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（例如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合，得到1 mL蛋白标记储备液。 
注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。 
注2： 应将蛋白质溶于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。 
注3：若使用不纯的抗体、牛血清蛋白（BSA）和明胶稳定的抗体，则标记效果不会特别好。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得最佳标记结果。 
注4：如果蛋白质浓度小于2mg / mL，则缀合效率明显降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。
 
2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到FITC-xtra小瓶中以制备10-20mM储备溶液，通过移液或涡旋混合均匀。 

注：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液B）随配随用，保证使用的溶液的新鲜。染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。溶液B可以在不受光照和潮湿的情况下储存在冰箱中两周。

 
3.准备所需的蛋白质缀合物： 

注：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定最佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。
 
3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到蛋白质的小瓶中溶液（95μl溶液A），有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。 
注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。
3.2进行缀合反应。在有效摇动下将适量的染料储备溶液（溶液B）加入到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中。继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。
3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1; 如果需要，分别为15：1和20：1。
3.4使用预制的旋转柱或其他技术纯化所需的缀合物。
3.5计算上述4种缀合物的染料/蛋白质比（DOS）。
 
 
参考文献

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说明书
FITC-xtra 异硫氰酸荧光素.pdf