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Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒
| 货号 | 13804 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 200 Tests | 价格 | 3840 |
| Ex (nm) | 571 | Em (nm) | 585 |
| 分子量 | 溶剂 | ||
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒，葡萄糖-6 – 磷酸（ G6P ）是用于葡萄糖到细胞转运的关键中间体。 G6P也可在肝脏和肌肉中转化为糖原或淀粉进行存储。 G6P是由葡萄糖-6 – 磷酸脱氢酶（ G6PD）用来生成在NADPH形式的还原当量。其中G6PD缺乏引起的溶血性贫血。 AAT Bioquest的Amplite 荧光葡萄糖-6 – 磷酸检测试剂盒提供了用于生物样品如血清，血浆，以及细胞培养样品中检测G6P一种简单，灵敏，快速的基于荧光的方法。在偶联酶测定中， 比例是专门由一个荧光NADPH传感器监测。荧光信号可以通过荧光酶标仪在EX/ EM = 530-570 nm/590-600纳米读取（建议EX / EM = 540 nm/590 nm建议）。Amplite G6P测定试剂盒，我们能够检测少至0.3 μM G6P在100微升反应体积。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收： | 575/605nm |
| 推荐孔板： | 透明底板 |
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 540nm |
| 发射： | 590nm |
| cutoff： | 570nm |
| 推荐孔板： | 黑色孔板 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备G6P工作溶液（50 µL）
2.添加G6P标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光增加
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NADP储备溶液（100X）：
在NADP小瓶（组分C）中加入100 µL H2O，制成100X NADP储备溶液。
1.2 G6P标准溶液（100 mM）：
将100 µL H2O或1x PBS缓冲液加到G6P标准品（组分D）的小瓶中，制成100 mM G6P标准品溶液。
2.标准溶液
G6P标准
将10 µL 100 mM G6P标准溶液加到990 µL 1x PBS缓冲液中，生成1 mM G6P标准溶液。 然后，将100 µL 1 mM G6P标准溶液添加到900 µL 1 x PBS缓冲液中，制成100 µM G6P标准溶液（G6P7）。 取100 µM G6P标准溶液（G6P7）并进行1：3连续稀释，以使用1x PBS缓冲液连续稀释G6P标准溶液（G6P6- G6P1）。注意：稀释的G6P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。
3.工作溶液
3.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中，并充分混合。
3.2将50 µL 100X NADP储备溶液添加到组分A + B的瓶子中，并充分混合以制成G6P工作溶液。 注意：此G6P工作溶液足以用于一个96孔板。
样品操作及实验分析
表1.黑色96孔微孔板中G6P标准品和测试样品的布局。 G6P = G6P标准品（G6P1-G6P7，0.14至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| G6P1 | G6P1 | … | … |
| G6P2 | G6P2 | … | … |
| G6P3 | G6P3 | ||
| G6P4 | G6P4 | ||
| G6P5 | G6P5 | ||
| G6P6 | G6P6 | ||
| G6P7 | G6P7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| G6P1-G6P7 | 50ul | 连续稀释（0.14至100 µM） |
| BL | 50ul | 稀释缓冲液 |
| TS | 50ul | 测试样品 |
1.根据表1和2中提供的布局，准备G6P标准品（G6P），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
2.在G6P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G6P工作溶液，以使G6P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL G6P工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。
3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至2小时。
4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（最佳Ex / Em = 540/590 nm，截止= 570nm）下监测荧光的增加。 注意：该板的内容物也可以转移到白色透明底板上，并通过吸光度酶标仪以A575nm / A605nm的比率进行读取。 与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。
参考文献
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Authors: Legeza B, Balazs Z, Nashev LG, Odermatt A.
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Glucose-6-phosphate dehydrogenase status and severity of malarial anaemia in Nigerian children
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| 产品名称 | 货号 |
| Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒 | Cat#13805 |