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Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物
| 货号 | 11009 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免受潮, 避免光照 |
| 规格 | 1 mg | 价格 | 1236 |
| Ex (nm) | 648 | Em (nm) | 668 |
| 分子量 | ~400 | 溶剂 | DMSO |
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢的荧光探针，我们的Amplite IR是一种荧光性过氧化酶底物，与过氧化酶和H2O2反应时，产生近红外荧光。它可以用来检测H2O2和过氧化酶。Amplite IR产生的物质在647nm处具有最大吸收峰，同时在647nm处有最大发射峰。这种近红外吸收和荧光将检测的本底降至最小，这些本底经常由自我吸收和/或生物样品自身的荧光，但是在600nm附近自身光吸收基本没有。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物。
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适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 640nm |
| 发射： | 680nm |
| cutoff： | 650nm |
| 推荐孔板： | 黑色底板 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.制备100μMAmplite IR 0.8 U / ml的过氧化物酶在磷酸盐缓冲液，并在孔中加入50微升
2.添加H 2 O 2标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育0-30分钟
4.监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光强度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1Amplite IR原液：
加入适量无水DMSO，制成10至25 mM Amplite IR原液。
2.工作溶液
Amplite IR工作溶液（2X）：
为了在50 mM磷酸盐缓冲液或您选择的缓冲液中达到每孔50至100μM的最终浓度，在管中制备100至200μM浓度的溶液。每孔需要50μL。 注意：在硫醇如DTT和b-巯基乙醇存在下，Amplite IR不稳定。高于10μM（最终浓度）的硫醇可显着降低测定动态范围。NADH和谷胱甘肽（从GSH中还原）可能会干扰测定。注意：我们建议您每次进行实验时都使用新鲜原液。
操作步骤
1.在上清液中进行H2O2测定
1.1将50μL的2X Amplite IR工作溶液（来自步骤1.2）添加到H 2 O 2标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总H2O2测定体积为100μL/孔。注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL2XAmplite IR工作溶液。
1.2在室温下孵育反应0至30分钟，避光。
1.3使用荧光板读数器监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光增加。 注意：Amplite IR过氧化物酶底物易于自氧化，因此一旦加入H2O2反应混合物就读取荧光，以提高信噪比。
1.4空白孔中的荧光（仅使用测定缓冲液）用作对照，并从具有H2O2的那些孔的值中减去。
2.运行H2O2测定法的细胞：
2.1Amplite IR可用于测量细胞中H2O2的释放。以下是建议的方案，可根据您的具体研究需要进行修改.Dipite IR工作溶液应按步骤1.2制备，但磷酸盐缓冲液应替换为细胞培养系统中使用的培养基。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）; （b）中。汉克斯平衡盐溶液（HBSS）; 或（c）无血清培养基。
2.2在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要激活细胞。 注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。
2.3加入50微升H2O2反应混合物至细胞的每个孔中，注意：对于384孔板中，添加25μL细胞和25微升H2O2反应混合物倒入每个孔。
2.4在室温下孵育反应0至30分钟，避光。
2.5使用荧光板读数器监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光增加。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在670nm波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。 注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。
参考文献
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Micro-volume wall-less immunoassays using patterned planar plates
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